Принцип роботи піпетки Пастера в основному базується на гравітаційному-потоці та капілярній дії в поєднанні з ручним керуванням різниці тиску повітря для полегшення аспірації та переміщення рідин.
Керування всмоктуванням вручну: оператор всмоктує широкий кінець піпетки-орально або за допомогою додаткової гумової груші-, щоб створити негативний тиск у трубці, таким чином втягуючи рідину в тонкий наконечник.
Роздача-під дією сили тяжіння: після припинення всмоктування рідина витікає природним шляхом під дією сили тяжіння; Дозування можна також полегшити, обережно стиснувши корпус піпетки або нахиливши приймальну ємність.
Відтворюваність крапель: шляхом калібрування співвідношення «крапель на мілілітр» піпетка забезпечує приблизний кількісний перенос, що робить її придатною для процедур, які вимагають повторюваності, а не абсолютної точності.
Гарантія стерильності: перед використанням ватну пробку можна вставити в широкий кінець і простерилізувати, щоб запобігти мікробному забрудненню під час роботи-. Ця практика особливо поширена в мікробіологічних експериментах.